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北京信鸽医院 
所在地区：北 京 文章总数：19篇 推荐篇数： 0篇 留言数量：4条 访问次数： 鸽舍积分： 32   建立时间：2007-9-6  |
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作者：北京信鸽医院
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分类：收藏文章
发布时间：2013-11-8 17:55:21
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免疫学方法不但可以确定病原，还可以检测鸽体产生的抗体。通过检查病原，可以确诊疾病，定期检测血清抗体浓度的变化，可以对鸽群免疫状态免疫效果进行定量分析，不仅有利于调整免疫程序，而且能为防治疾病提供可靠依据。免疫学诊断方法有多种，如病毒血凝试验和病毒血凝抑制试验、试管凝集试验可以检查病毒、细菌等微生物刺激鸽体产生的抗体等。
（一）病毒血凝试验和血凝抑制试验 病毒血凝试验和血凝抑制试验是一种快速、微量、简便、准确的血清学诊断方法，病毒血凝试验可以检查有无病毒，而病毒血凝抑制试验可以检查相应抗体，用于鸽新城疫、鸽痘等流行病的诊断和免疫监测。以鸽新城疫病诊断为例，将病毒血凝试验和血凝抑制试验介绍如下。
鸽新城疫病毒有血凝特性，即与鸡、鸽等红细胞相遇时，在一定条件下能凝集这些红细胞，而且凝集现象稳定而明显。利用这一特性，将未知病毒与鸡或鸽的红细胞一起作用，如果发生红细胞凝集，就说明未知病毒可能是鸽新城疫病毒或类似病毒。这就是病毒的血凝试验。
反之，如果用一定浓度的鸽新城疫病毒作为已知病毒，与待测病鸽的血清作用，如果病鸽血清中含有抗新城疫抗体，则该抗体能与病毒结合，接着加入鸡或鸽子红细胞后，红细胞不再发生凝集，这种反应就是病毒血凝抑制试验。在病毒的血凝抑制试验中，还可以反映出血清中搞体的浓度，从而检查病鸽对病毒的反应程度，或者正常鸽注射疫苗后的免疫效果。
微量法病毒血凝试验和血凝抑制试验通常在96孔反应板上进行。
1、病毒血凝试验 操作步骤如下。
第一步，制备pH值7.0—7.2磷酸缓冲盐水，配方如下：氯化钠170克，磷酸二氢钾13.6克，氢氧化钠3克，蒸馏水1000毫升。将以上各成分溶解后，高压灭菌，4℃保存，临用时用蒸馏水作20倍稀释。
第二步，制备0.5%鸡红细胞悬液，方法如下：从健康公鸡翅静脉采血，加入有抗凝剂（3.8%枸橼酸钠液）的试管内，用20倍量pH值7.0—7.2磷酸缓冲盐水洗涤3—4次，每次以2000转/分离心3次，每次10—15分钟。每次离心后弃去上清液，并彻底吸去血浆及白细胞，最后用磷酸缓冲盐水按红细胞体积稀释成0.5%悬液，0℃—4℃冰箱保存。
第三步，按表1-1逐步操作。用微量加样器向反应板上每个孔中分别加磷酸缓冲盐水50毫升。更换加样器吸头，吸取50微升病毒液，加于第一孔中，用该加样器吹吸3次使病毒混合均匀，然后向第二孔移入50微升，挤压3次后再向第三孔移入50微升，依次倍比稀释到第十一孔，使第十一孔中液体混合后从中吸出50微升弃去。第十孔不加病毒抗原，只作对照。再更换微量加样器吸头，吸取0.5%红细胞悬液依次加入12个孔中，每孔加50微升。加样完毕，将反应板轩于微型振荡器上振荡1分钟，或置37℃恒温培养箱中作用20-30分钟后取出，观察并判定结果。
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